肉的宰后嫩化大部分归因于肌原棉玻璃仟维架构设计的伤害，肌原棉玻璃仟维架构设计是由内源性蛋清溶解酶光吸附肌原棉玻璃仟维和肿瘤肿瘤细胞核核核骨架蛋清从而造成的。与二十多年来一直都在是喜爱中心点的钙蛋清酶各种不同，胱天蛋清酶（caspases）较近称为感好奇心话题。胱天蛋清酶在肿瘤肿瘤细胞核核核凋亡的程序执行时段.起着至关决定性的本事，各举caspase-3在去世蛋清溶解中的本事是各个面和非常复杂的，所以值得一看进一歩的深入分析。S-亚硝基化确认的转换钙释放出、力量代谢率、蛋清质光吸附和肿瘤肿瘤细胞核核核凋亡来的转换肉质地，以及嫩度和持水本事。下一步的深入分析发掘S-亚硝基化可下跌根据线粒体的caspase-3级联反應，这很有可能是肩部肌肉肿瘤肿瘤细胞核核核凋亡和羊肉品质保证变化规律的愿意。caspase-3的的深入分析侧重是其与肿瘤肿瘤细胞核核核凋亡的关联，当然，不多有的深入分析探析S-亚硝基化的转换caspase-3的长效机制。

2024年9月由上海农林业本科大学张万刚传授公司在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱微生物为该研究提供了亚硝基化遮盖组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文翻译关键词：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

学术期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202几年会影响指数：5.7

发表文章的时间：2024年9月

潜在客户企事业单位：南京农业大学

理论研究物料：蛋白

拜谱展示 技术应用：亚硝基化修饰组学

技艺路径：

一、研究方案报告单

01.Caspase-3特异性

当今尚不非常清楚NO对caspase-3的克自制用要不要归因于NO介导的S-亚硝基化，各种酸度梯度方向的GSNO最为外源性NO生产，以诱惑caspase-3的身体S-亚硝基化。结局说明，与不会GSNO的组相比较，100、200和400μM GSNO组的caspase-3生物强势减小（图1），与原先报到一样。GSNO处理减小caspase-3生物的存在缘由仍亟待阐发。

图1 不一样的氧浓度的GSNO治理对caspase-3生物的影向

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化方面

深入分析Caspase-3的亚硝基化层面，以确立GSNO对Caspase-3的化学反应性。经GSNO加工处理后，的探测到caspase-3血清S-亚硝基化硬度加强（图2）。这样的结局证实，外源性GSNO激发可取得成功诱发caspase-3的体内S-亚硝基化。真让人惊艳的是，在不会GSNO普遍存在的对比组中的探测到一位衰弱的S-亚硝基化带，这证实caspase-3概率发生了内源性的S-亚硝基化。不仅而且，本深入分析中caspase-3的S-亚硝基化层面较高，而caspase-3的化学活化下降，这与以后的深入分析不符。或许，caspase-3的特情人S-亚硝基化掩盖位点尚不看清楚，还想要进步骤的深入研究。

图2 GSNO清理对caspase-3S-亚硝基化标准的决定

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化装饰组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码队列。暗蓝色符号的编码队列带表S-亚硝基化肽，黑色符号的C带表S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3分解结蛋清

结蛋清有所作为一款决定性的组织骨架蛋清，在能维持肌组织机构的机构完全篇性和内缩性这方面起着决定性反应，探索S-亚硝基化caspase-3对结蛋清光可降解的神经敏非理性有着决定性功用。与Std（未用胱天蛋清酶-3和GSNO孵育的默认值肌合成纤维棉蛋清）组比起来，0 μM GSNO组（肌原合成纤维棉和caspase-3的孵育，无GSNO）的完全篇结蛋清含磷量相关性减低，提升caspase-3对结蛋清有着内在的蛋清电离力。在GSNO孵育后，完全篇结蛋清的含磷量强烈曾加（P < 0.05）。前者，当GSNO含水量提升时，完全篇结蛋清的含磷量保持调整（P < 0.05）（图5）。这个会发现体现了，SNO修饰语的caspase-3以技术水平依靠的模式克制结蛋清的光可降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3降解塑料结核蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3化学降解肌钙蛋白质-T

肌钙血清-T (TnT)是原肌球血清调试进行肌肉群缩水的细细的的须要肌原黏胶氯纶血清。TnT的光分解共同点是论文判断到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化因素下，caspase-3对TnT的光分解实际情况如图甲如图所示6如图所示，与Std组（没含caspase-3和GSNO的肌原黏胶氯纶）比较，caspase-3组中30 kDa TnT场面重要加强，阐明caspase-3积极参与了TnT的光分解，显然，caspase-3与GSNO的孵育会造成30 kDa TnT的缩减。在100和200 μM GSNO组左右未论文判断到特别的不同之处(P > 0.05)，而当GSNO的盐浓度达成400 μM 时，该场面重要增多(P < 0.05)。这类看到阐明了SNO淡化的caspase-3对TnT光分解的限开发用。结血清和TnT是caspase-3的敏感度底物，而GSNO解决缩减caspase-3的生物或者会造成肌原黏胶氯纶血清光分解水平缩减。综合上面的上述，NO诱导性的S-亚硝基化可不可以用淡化半胱氨酸残基来调试caspase-3的生物，继而进步骤影向其对结血清和TnT的血清水解反应力量，故而影向鸡肉好品质。

图6. S-亚硝基化caspase- 3光降解肌钙蛋清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本探索致力于探究S-亚硝基化对caspase-3突显的应响基本接下来对牛羊肉肌原钎维体内生物降解的应响。球淀粉酶酶S-亚硝基化需要突显caspase-3的半胱氨酸残基，故而导至caspase-3化学活化降底，进几步调控了其对牛羊肉肌原钎维球淀粉酶酶的球淀粉酶酶蛋白质水解水平。

三、拜谱总结ppt

科研适用了酶活法测，亚硝基化突显组学解析，WB等测试方式方法，发觉核蛋白质含量质质S-亚硝基化应该突显caspase-3的半胱氨酸残基，这出现了caspase-3灵活性的减少，齐头并进一个步骤可抑制了其对羊肉肌原氯纶核蛋白质含量质质的核蛋白质含量质质油脂水解能力素质。本科研为解答核蛋白质含量质质质亚硝基化对色泽的监测管理机制提供数据了一大个新的第一人称。

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分类文献资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663